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牛組胺(HIS)ELISA試劑盒分析方法

牛組胺(HIS)ELISA試劑盒分析方法

牛組胺(HIS)ELISA試劑盒E操作注意事項(xiàng)如下:(1) 加樣:在ELISA中除了包被外,一般需進(jìn)行4~5次加樣。在定性測(cè)定中有時(shí)不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性,例如規(guī)定為加樣1滴。此時(shí)應(yīng)該使用相同口徑的滴管,保持準(zhǔn)確的加樣姿勢(shì),使每滴液體的體積基本相同。在定量測(cè)定中則加樣量應(yīng)力求準(zhǔn)確。標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制。加樣時(shí)應(yīng)將液體加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出現(xiàn)氣泡。

(2) 孵育:在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加結(jié)合物后,此時(shí)反應(yīng)的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定的要求,保溫容器水浴箱,可使溫度迅速平衡。各ELISA板不應(yīng)疊在一起。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)⑵桨宸旁诘撞繅|有濕紗布的濕盒中。濕盒應(yīng)該是金屬的,傳熱容易。如用保溫箱,空濕盒應(yīng)預(yù)先放在其中,以平衡溫度,這一步驟在室溫較低時(shí)更為重要。加入底物后,反應(yīng)時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。

(3) 洗滌:洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是反應(yīng)步驟,但卻是決定成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)中沒(méi)有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

(4)顯色及終止反應(yīng):顯色是酶促反應(yīng),應(yīng)按規(guī)定的溫度和時(shí)間操作,用酸終止。

(5) 結(jié)果判斷:用比色計(jì)測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于ELISA板底的平整與透明度和比色計(jì)的質(zhì)量。


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